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基因工程最常用技术-基因工程最常用技术是什么

简述信息一览:

基因工程反转录法和化学法是什么

基因工程反转录法是体外使用反转录酶、dNTP、Buffer、反转录引物,利用RNA为模板合成cDNA的一种方式,是现在最常用的方式方法技术之一。基因工程化学法是指按照基因序列人工一个一个加入碱基(ATCG四种)合成基因序列的方法。

一条途径是以目的基因转录成的信使RNA为模板,反转录成互补的单链DNA,然后在酶的作用下合成双链DNA,从而获得所需要的基因。另一条途径是根据已知的蛋白质的氨基酸序列,推测出相应的信使RNA序列,然后按照碱基互补配对原则,推测出它的结构基因的核苷酸序列,再通过化学的方法,以单核苷酸为原料合成目的基因(如图)。

基因工程最常用技术-基因工程最常用技术是什么
(图片来源网络,侵删)

化学合成法:蛋白质---氨基酸序列---RNA碱基序列---DNA碱基序列―→用4种脱氧核苷酸人工合成目的基因 反转录法:分离出供体细胞mRNA---单链DNA---合成目的基因 A选项,看上面的合成目的基因过程:因为题干告诉我们已经知道小片段基因的碱基序列,而不是已经有该基因所转录出的mRNA,所以A选项错误。

基因工程常用的酶有

基因工程中常用的工具酶不外乎DNA聚合酶,RNA逆转录酶,DNA外切酶,RNA酶,限制性核酸内切酶等。其中种类最多的就是限制性核酸内切酶,利用不同的限制性核酸内切酶组合,可以实现将不同目的片段克隆至目标载体,而这是其他的酶无法替代的。

目前到高中阶段为止有以下几种酶1限制性内切酶(也叫限制酶),是在转基因技术中对细菌的环状质粒以及目的基因进行切割的一种,在使用时应注意用同种限制酶切割才会产生相同的粘性末端,一种限制酶只能识别一种序列排列方式,大部分都是回文序列,像CCGG之类的比较多。

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然后再从筛选的寄主细胞内分离提纯所需的克隆载体,可以得到插入DNA的许多拷贝,从而获得目的基因的扩增。工具酶:基因工程涉及众多的工具酶可粗略的分为限制酶,连接酶,聚合酶,核酸酶和修饰酶五大类。其中,以限制性核酸内切酶和DNA连接酶在分子克隆中的作用最为突出。

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