蛋白质角标-蛋白质的标曲

简述信息一览：

• 1、怎么测定蛋白质的含量?
• 2、真核生物与原核生物在翻译的起始过程中有哪些区别
• 3、真核生物和原核生物翻译的区别
• 4、考马思亮蓝染色法测定蛋白质含量的实验中,磷酸盐缓冲
• 5、常用来测定蛋白质含量的方法有哪些,优缺点是什么
• 6、为什么folin酚法只适合测定浓度低的蛋白质

怎么测定蛋白质的含量?

1、由于蛋白质含氮量比较恒定，可由其氮量计算蛋白质含量，故此法是经典的蛋白质定量方法。双缩脲法 双缩脲法是一个用于鉴定蛋白质的分析方法。双缩脲试剂是一个碱性的含铜试液，呈蓝色，由1%氢氧化钾、几滴1%硫酸铜和酒石酸钾钠配制。

2、测定蛋白质含量的方法有多种，常用的包括比色法、光谱法和生物学法。以下是对这一问题的详细描述：比色法尺度法 比色法是测定蛋白质含量最常用的方法之一。原理是利用蛋白质与染色剂反应生成复合物，进而通过比色反应来测定蛋白质浓度。

3、间接测定法：蛋白质与某些酸性或碱性色素分子结合形成不溶性的盐沉淀。用分光光度计测定未结合的色素，以每克样品结合色素的量来表示蛋白质含量的多少。

4、测定蛋白质含量的方法有哪些如下：直接测定UV法：这种方法是在280nm波长，直接测试蛋白。选择Warburg公式，光度计可以直接显示出样品的浓度，或者是选择相应的换算方法，将吸光值转换为样品浓度。蛋白质测定过程非常简单，先测试空白液，然后直接测试蛋白质。从而显得结果很不稳定。

5、试剂：a、标准蛋白质溶液：用标准的结晶牛血清清蛋白或标准酪蛋白，配制成10mg/ml的标准蛋白溶液，可用bsa浓度1mg/ml的a280为0.66来校正其纯度。 如有需要，标准蛋白质还可预先用微量凯氏定氮法测定蛋白氮含量，计算出其纯度，再根据其纯度，称量配制成标准蛋白质溶液。

真核生物与原核生物在翻译的起始过程中有哪些区别

场所不同，真核细胞是在细胞核或者是含DNA的细胞器内转录的。而原核细胞是在拟核或者细胞质（质粒）转录的。（原核生物基因的转录和翻译通常是在同一时间同一地点进行的，即在转录未完成之前翻译便开始进行。真核生物基因的转录和翻译具有时间和空间上的分隔。

【答案】：①真核生物参与起始复合物形成的IF更多。②原核生物mRNA有S-D序列又称RBS（核糖体结合位点），真核生物mRNA有5端帽子结构。

起始氨酰tRNA不同：原核生物的为f而真核生物的起始氨酰tRNA为Met-tRNAMet。（4）原核生物mRNA上有能与16SrRNA配对的SD序列，而真核生物没有这样的序列。（5）原核生物起始复合物的形成过程中，30S小亚基先与翻译起始因子IF-1，IF-3结合，通过SD序列与mRNA模板结合。

原核生物无非编码区，在转录和翻译中只以母链为模板。真核生物的转录及翻译受非编码区上的RNA结合酶位点控制，从编码区开始转录和翻译。

原核生物因为没有核膜，所以转录的同时也进行翻译。真核生物转录后，mrna由细胞核进入细胞质后，才开始翻译。

真核生物和原核生物翻译的区别

原核生物的***在拟核，原生生物的核区域无核膜包围，则转录、翻译可以同时进行。

原核生物没有内含子，转录更快，而且是边转录，边翻译，是个连续过程，比起真核生物来，效率更高。真核生物翻译比较烦琐，转录需要切去内含子，还需要修饰，而且翻译过程要在转录完成之后，而不是边转录边翻译。

真核生物由于有细胞核，核膜将核质与细胞质分隔开来，因此，转录是在细胞核中进行的，翻译则是在细胞质中进行的。可见，真核生物基因的转录和翻译具有时间和空间上的分隔。上述真核生物基因转录后的剪切、拼接和转移等过程，都需要有调控序列的调控，这种调控作用是原核生物所没有的。

考马思亮蓝染色法测定蛋白质含量的实验中,磷酸盐缓冲

1、考马斯亮蓝法测定蛋白质中，样品含有蔗糖和甘油排除：将100mg考马斯亮蓝G-250溶于50ml95%乙醇，加入100ml85%的磷酸，用蒸馏水补充至200ml，此染液放4℃至少6个月保持稳定。标准曲线蛋白质样本的准备：尽量使用与待测样本性质相近的蛋白质作为标准品，例如测定抗体，可用纯化的抗体作为标准。

2、考马斯亮蓝法测定蛋白质含量流程 该方法用于大多数蛋白质的定量是比较精确的，但不适用于小分子碱性多肽的定量。如核糖核酸酶或溶菌酶。去污剂的浓度超过0．2％影响测定结果。如tritonx-100、sds、np-40等。

3、你看看吧，你提到的蛋白或许纯度不高，那些沉淀里或许不是蛋白质，你多搅一会，震荡半小时到一小时，离心去上清，用考马斯亮蓝G250试剂去测一下蛋白的量。再多看几篇文献，看看溶剂是否还需要其他成分。

4、考马斯亮蓝法测定蛋白质含量—标准曲线制作 （一）、试剂：考马斯亮蓝试剂：考马斯亮蓝G—250 100mg溶于50ml 95%乙醇，加入100ml 85% H3PO4，雍蒸馏水稀释至1000ml，滤纸过滤。最终试剂中含0.01%（W/V）考马斯亮蓝G—250，7%（W/V）乙醇，5%（W/V）H3PO4。

5、因此可用于蛋白质的定量测定。蛋白质与考马斯亮蓝结合在2min左右的时间内达到平衡，完成反应十分迅速；其结合物在室温下1h内保持稳定。该法试剂配制简单，操作简便快捷，反应非常灵敏，灵敏度比Lowry法还高4倍，可测定微克级蛋白质含量。不利因素主要是特殊蛋白的结构，缓冲液组分中有干扰试剂等。

常用来测定蛋白质含量的方法有哪些,优缺点是什么

双缩脲法是一个用于鉴定蛋白质的分析方法。双缩脲试剂是一个碱性的含铜试液，呈蓝色，由1%氢氧化钾、几滴1%硫酸铜和酒石酸钾钠配制。当底物中含有肽键时（多肽），试液中的铜与多肽配位，配合物呈紫色。可通过比色法分析浓度，在紫外可见光谱中的波长为540nm。鉴定反应的灵敏度为5-160mg/ml。

蛋白质含量测定法，是生物化学研究中最常用、最基本的分析方法之一。目前常用的有四种古老的经典方法，即定氮法，双缩尿法（Biuret法）、Folin－酚试剂法（Lowry法）和紫外吸收法。另外还有一种近十年才普遍使用起来的新的测定法，即考马斯亮蓝法（Bradford法）。

直接测定UV法 这种方法是在280nm波长，直接测试蛋白。选择Warburg公式，光度计可以直接显示出样品的浓度，或者是选择相应的换算方法，将吸光值转换为样品浓度。蛋白质测定过程非常简单，先测试空白液，然后直接测试蛋白质。从而显得结果很不稳定。

测定蛋白质的方法可分为两大类：一类是利用蛋白质的共性，即含氮量、肽键和折射率测定蛋白质含量；另一类是利用蛋白质***定氨基酸残基、酸性和碱性基团以及芳香基团等测定蛋白质含量。常见的方法有：凯氏定氮法、双缩脲法、酚试剂法及紫外吸收法。

双缩脲法是第一个用比色法测定蛋白质浓度的方法，硫铵不干扰显色， Cu2+与蛋白质的肽键，以及酪氨酸残基络合，形成紫蓝色络合物，此物在540nm波长处有最大吸收。

为什么folin酚法只适合测定浓度低的蛋白质

间接测定法：蛋白质与某些酸性或碱性色素分子结合形成不溶性的盐沉淀。用分光光度计测定未结合的色素，以每克样品结合色素的量来表示蛋白质含量的多少。

原理 福林酚法测定蛋白质含量的原理主要基于蛋白质的肽键与碱性溶液（如碳酸钠）反应形成碱性氨基酸，然后加入福林酚试剂。福林酚试剂是一种弱碱，可以与酸性的氨基酸反应生成一种蓝色的化合物，颜色的深浅与蛋白质的含量成正比。因此，通过测量样品的吸光度，就可以确定蛋白质的含量。

因而本测定法通常只适用于测定蛋白质的相对浓度（相对于标准蛋白质）。

Folin酚试剂在Cu＋的催化下，磷钼酸-磷钨酸盐被蛋白质中的芳香族氨基酸残基还原，产生深蓝色的钼蓝和钨蓝混合物，其最大吸收峰在745～750nm处。在一定的浓度范围内，所形成蓝色的深浅与蛋白质含量之间有线性关系，可用于蛋白质含量的测定。在蛋白质混合物经过粗分离、纯化后，可以得到目的蛋白。

Folin-酚试剂法测定蛋白质含量是双缩脲法的发民，所用的试剂是由两部分组成的。第一部分相当于双缩脲试剂，第二部分为Folin-酚试剂（磷钨酸和磷钼酸混合液）。因此，反应的程序也是分两步进行的。

LoWry法是双缩脲法（BIureT）和福林酚法（FolIn-酚）的结合与发展。其原理是蛋白质溶液用碱性铜溶液处理后，碱性铜试剂与蛋白质中的肽键作用产生双缩脲反应，形成铜—蛋白质的络合盐。

关于蛋白质角标和蛋白质的标曲的介绍到此就结束了，感谢你花时间阅读本站内容，更多关于蛋白质的标曲、蛋白质角标的信息别忘了在本站搜索。