基因工程标记基因的筛选-标记基因的筛选原理***讲解

简述信息一览：

• 1、基因工程运载体为什么需要标记基因?
• 2、标记基因
• 3、有关基因工程中目的基因的检测的问题。
• 4、在基因工程中,标记基因是怎么标记的?同位素标记法?
• 5、作为基因工程载体,其应具备哪些条件
• 6、标记基因鉴定与DNA分子杂交检测有什么区别

基因工程运载体为什么需要标记基因?

1、一定需要！标记基因是一种已知功能或已知序列的基因，能够起着特异性标记的作用。

2、标记基因的功能是为了方便我们更容易挑选被转化的个体。虽然直接检测转化子产物确定转化子从理论上来说可以，但是其数量之多工作量之大成本之高，决定了不可能***取这一方式进行转化个体筛选。

3、需要的，标记基因是一种能够起着特异性标记作用的基因，是重组DNA载体的重要标记，例如：具有青霉素抗性基因的载体被转入受体细胞后，就可以根据受体细胞是否具有青霉素抗性来判断是否获得了目的基因。

4、标记基因是在运载体本来就有的可以识别的基因，之后将目的基因插入运载体构建表达载体，然后将表达载体导入受体细胞。但是在此过程中表达载体不一定导入了受体细胞于是就要利用到标记基因所表达的性状来鉴定是否将表达载体导入成功和筛选出导入成功的细胞。

标记基因

1、标记基因是帮助对转基因生物工程体进行筛选和鉴定的一类外源基因，包括选择标记基因和报告基因。在选择压下，不含标记基因及其产物的非转化细胞和组织死亡，转化细胞由于有抗性而可以继续存活。

2、什么是标记基因：标记基因就是载体上的一个记号，用来检测目的基因是否成功导入受体细胞。机理是：前提目的基因，标记基因都在质粒上，只要知道标记基因进入受体细胞就证明质粒也进入受体细胞了，又因为目的基因也在质粒上，所以也就证明目的基因进入到受体细胞了。一般都是一些抗性基因作为标记基因。

3、标记基因是一种已知功能或已知序列的基因，标记基因能够起着特异性标记的作用。在基因工程意义上来说，它是重组DNA载体的重要标记，通常用来检验转化成功与否。

有关基因工程中目的基因的检测的问题。

第一个问题：生物工程中检测的目的是为了确认目的基因确实是按照设计好的方案插入了。

检测分三种，首先是通过对标记基因的检测，通常用DNA分子杂交技术，来检验标记基因（目的基因）是否成功的导入受体细胞。再用DNA分子杂交技术，来看目的基因导入后是否成功转录出信使RNA。最后可以用抗原-抗体检验，来验证导入基因是否成功表达。用标记基因检测与鉴定 只是一个简写。

载体上的抗性基因是标记基因，是用来检测目的基因是不是导入了受体细胞。基因工程第四步目的基因的检测和鉴定是检测目的是不是插入了受体细胞的DNA上，另外即使是插入了受体细胞的DNA上，是不是表达也要检测。至于标记基因，前面检测的时候用到过，这一步就不用了。

检测目的基因是否完成表达翻译成蛋白质。提取蛋白质，用相应的抗体进行抗原——抗体杂交。⑵、鉴定：个体生物学水平鉴定，鉴定抗性等。

在基因工程中,标记基因是怎么标记的?同位素标记法?

标记基因是抗性基因或者荧光蛋白基因。如果受体细胞能抵抗相应的抗生素，或显示荧光效果，就证明标记基因已被导入受体细胞且正常表达，那么目的基因同样也是。***用同位素标记的话，如果被导入，但是没有表达或DNA被破坏，细胞同样可以检测到放射性。不准确。

标记基因是一种已知功能或已知序列的基因，能够起着特异性标记的作用。在基因工程意义上来说，它是重组DNA载体的重要标记，通常用来检验转化成功与否；在基因定位意义上来说，它是对目的基因进行标志的工具，通常用来检测目的基因在细胞中的定位。

额，标记基因的用途首先要弄懂，一般是带有抗生素抗性的，或者是可以通过染色等手段能检测到其产物的一些基因序列；目的，为了方便在构建载体时阳性的筛选以及体外扩增、转化。

作为基因工程载体,其应具备哪些条件

在宿主细胞中能保存下来并能大量***，且对受体细胞无害，不影响受体细胞正常的生命活动。有一定的标记基因，便于进行筛选。如大肠杆菌的pBR322质粒携带氨苄青霉素抗性基因和四环素抗性基因，就可以作为筛选的标记基因。

载体应具备的三个基本条件：①具有外源基因插入位点；②能携带外源DNA进入受体细胞并能自我***；③具有选择标记以便于筛选。载体是基因工程中为携带外源DNA、实现外源DNA的无性繁殖或表达有意义的蛋白质所***用的一些DNA分子，具有自我***和表达功能。

拷贝数高分子量较小、具有选择标记、具有***起始点。首先，能在细菌中稳定存在，有较高的拷贝数，具有选择标记的每一个标记基因都含有单一的酶切位点。其次，在***时，需在特定的位点起始，具有特定核苷酸排列顺序的片段，即***起始点。

基因工程对载体的要求：（1）在宿主细胞内能独立***。（2）有选择性标记。（3）有一段多克隆位点。外源DNA插入其中不影响载体的***。（4）分子量小，拷贝数多。（5）容易从宿主细胞中分离纯化。密码子的性质 通用性：高等生物和低等生物在很大程度上共用一套密码子，体现了生命的同一性。

对理想的基因工程载体一般至少有以下几点要求：①能在宿主细胞中***繁殖，而且要有较高的自主***能力。②容易进入宿主细胞，而且进入效率越高越好。③容易插入外来核酸片段，插入后不影响其进入宿主细胞和在细胞中的***。这就要求载体DNA上要有合适的限制性核酸内切酶位点。每种酶的切位点只有一个。

基因工程的载体必备的三个条件：①在宿主细胞中能保存下来并能大量***；②有多个限制酶切点，而且每种酶的切点最好只有一个；③有一定的标记基因，便于进行筛选。

标记基因鉴定与DNA分子杂交检测有什么区别

标记基因检测是用来筛选含有目的基因的质粒的；而DNA分子杂交是检测含有目的基因的质粒是否导入到受体细胞，以及是否完成了转录过程的。

应该是用标记基因。因为标记基因可产生相应的性状（相应抗体），利用抗原－抗体杂交可表明目的基因是否已形成蛋白质产品进而筛选。DNA分子杂交技术是检验目的基因是否插入染色体DNA中（插入不一定表达）。

标记基因是检查目的基因是否整合到表达载体上。分子杂交是检查目的基因是否导入受体细胞。

检测分三种，首先是通过对标记基因的检测，通常用DNA分子杂交技术，来检验标记基因（目的基因）是否成功的导入受体细胞。再用DNA分子杂交技术，来看目的基因导入后是否成功转录出信使RNA。最后可以用抗原-抗体检验，来验证导入基因是否成功表达。用标记基因检测与鉴定 只是一个简写。

目的基因在转化和植物生长过程中会有丢失现象，分子杂交是DNA、RNA、蛋白水平的检测，更具真实性。

检测目的基因是否导入受体细胞，用到的是DNA的分子杂交技术。标记基因是用于筛选的。比如是导入的重组质粒中有青霉素抗性基因，那个没有导入重组质粒的细菌不能再含有青霉素的培养基上存活，这样剩下的都是导入重组质粒的细菌。

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