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提取蛋白质洗脱液作用-提取蛋白质洗脱液作用是什么

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简述信息一览:

请简述可用于蛋白质分离纯化的四种方法及其原理?

根据性质:蛋白质的两性解离。作用机制:异性电荷互相吸引,带点粒子在电场中泳动。影响因素:电荷种类及数量、分子大小及形状、溶液离子强度及pH等。③离子交换层析 根据性质:蛋白质的两性解离。作用机制:阳离子交换剂在pH0时,带有稳定的负电荷,可与蛋白质的阳离子结合。

蛋白质的分离纯化方法有:沉淀,电泳:蛋白质在高于或低于其等电点的溶液中是带电的,在电场中能向电场的正极或负极移动。根据支撑物不同,有薄膜电泳、凝胶电泳等。透析:利用透析袋把大分子蛋白质与小分子化合物分开的方法。

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(图片来源网络,侵删)

盐析法:盐析法的根据是蛋白质在稀盐溶液中,溶解度会随盐浓度的增高而上升,但当盐浓度增高到一定数值时,使水活度降低,进而导致蛋白质分子表面电荷逐渐被中和,水化膜逐渐被破坏,最终引起蛋白质分子间互相凝聚并从溶液中析出。

常见的分离提纯蛋白质的方法有: 盐析与有机溶剂沉淀:在蛋白质溶液中加入大量中性盐,以破坏蛋白质的胶体性质,使蛋白质从溶液中沉淀析出,称为盐析。常用的中性盐有:硫酸铵、氯化钠、硫酸钠等。盐析时,溶液的pH在蛋白质的等电点处效果最好。

常用的蛋白质纯化方法有离子交换色谱、亲和色谱、电泳、疏水色谱等等 离子交换色谱:蛋白质和氨基酸一样会两性解离,所带电荷决定于溶液pH。pH小于pI时蛋白质带正电,pH大于pI时蛋白质带负电。不同蛋白质等电点的蛋白质在同一个溶液中,表面电荷情况不同。

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(图片来源网络,侵删)

dna提取过程中,sds及kac的作用分别是什么

1、在裂解过程中,细菌蛋白质、破裂的细胞壁和变性的染色体DNA会相互缠绕成大型复合物,后者被十二烷基硫酸盐包盖。当用K+取代Na+时,复合物会从溶液中有效地沉淀下来,离心除去变性剂后,就可以从上清中回收复性的质粒DNA。

2、使DNA充分溶解于水中,离心后收集上清液。在上清中加入固体NaCl调节至6 mol/L,加入2倍体积95%乙醇,立即用搅拌法搅出。然后,分别用66%、80%和95%乙醇以及丙酮洗涤。最后,在空气中干燥即得DNA样品。此法提取的DNA中蛋白质含量较高,可在提取过程中加入SDS加以改良。

3、和DNA结合后平衡掉DNA中原有电荷,使结合物带上相同的负电何,从而可以使DNA在电场中移动速度只取决于DNA分子大小。哈哈,蛋白质电泳是这样的,DNA应该也是这样的吧。

4、SDS主要是破坏细胞膜,使部分蛋白变性并沉淀下来。乙酸钾主要是维持一个弱碱性的环境,防止RNA降解。

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