蛋白质相对迁移率-蛋白质相对迁移率标准曲线图
简述信息一览：
在用SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳法测定蛋白质分子量时,应注意哪些问题?_百度...
1、SDS-PAGE法要注意分离胶的浓度，要根据你蛋白的大小来定，如果蛋白分子量小，就最好选用高浓度的分离胶，没有影响的情况下选择浓度较小的，因为大浓度的胶太脆。其次是样品在上样前要离心处理，否则的话会有沉淀在孔中不能运动。考马斯蓝染色时最好在摇床上晃动，脱色也是。
2、．用SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳法测定蛋白质相对分子量时，必须同时作标准曲线。不能利用这次的标准曲线作为下次用。并且sDs—PAGE 测定分子量有10%误差，不可完全信任。3．有些蛋白质由亚基（如血红蛋白）或两条以上肽链（Q一胰凝乳蛋白酶）组成的，它们在巯基乙醇和SDS的作用下解离成亚基或多条单肽链。
3、蛋白负载量：确定合适的蛋白负载量以避免凝胶电泳过程中的扩散和模糊。根据实验目的和样品特性，进行适当的优化。电泳条件：选择适当的电泳条件，如电流强度、电压、电泳时间和缓冲液pH值等。根据目标蛋白的大小和预期分离效果进行调整。
4、IEF测量蛋白质等电点操作时应注意如下：蛋白质的双向电泳的向为等电聚焦（Isoelectrofocusing，IEF），根据蛋白质的等电点不同进行分离，第二向为SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE），按亚基分子量大小进行分离。经过电荷和分子量两次分离后，可以得到蛋白质分子的等电点和分子量信息。
蛋白质迁移率和迁移速度
1、蛋白质的迁移率：（MR）=（蛋白质样品移动距离/脱色后胶长）x（染色前胶长/指示剂移动距离）。根据蛋白质迁移率按上述直线方程式即可计算蛋白质分子量或通过标准曲线作图得出蛋白质分子量。根据蛋白质迁移率按上述直线方程式即可计算蛋白质分子量或通过标准曲线作图得出蛋白质分子量。
2、电荷的种类对蛋白质的电泳迁移率有显著影响。蛋白质在电场中移动的速度取决于其带电性质和电荷数量。如果蛋白质的带电性质为负，那么在电场中它将向正极移动，反之亦然。这是因为带电粒子在电场中会受到电场力的作用，从而产生移动。蛋白质颗粒大小也对其电泳迁移率有重要影响。
3、质量不同：相对分子质量、电荷数、分子形状、阻尼系数，前二最重要。如果是SDS-PAGE，只看分子量。相对迁移率（ MR） = （蛋白质样品移动距离/脱色后胶长） x （染色前胶长/指示剂移动距离）。
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