蛋白质纯化鉴定-蛋白质纯化鉴定方法
本篇文章给大家分享蛋白质纯化鉴定，以及蛋白质纯化鉴定方法对应的知识点，希望对各位有所帮助。
简述信息一览：
常用的蛋白质分离纯化方法有哪几种
1、常见的分离提纯蛋白质的方法有： 盐析与有机溶剂沉淀：在蛋白质溶液中加入大量中性盐，以破坏蛋白质的胶体性质，使蛋白质从溶液中沉淀析出，称为盐析。常用的中性盐有：硫酸铵、氯化钠、硫酸钠等。盐析时，溶液的pH在蛋白质的等电点处效果最好。
2、常用的蛋白质纯化方法有离子交换色谱、亲和色谱、电泳、疏水色谱等等 离子交换色谱：蛋白质和氨基酸一样会两性解离，所带电荷决定于溶液pH。pH小于pI时蛋白质带正电，pH大于pI时蛋白质带负电。不同蛋白质等电点的蛋白质在同一个溶液中，表面电荷情况不同。
3、【答案】：D 本题要点是蛋白质分离纯化的主要方法。蛋白质分离纯化的主要有盐析、透析、超离心、电泳、离子交换层析、分子筛。
4、蛋白质分离纯化常用技术有：沉淀，电泳：蛋白质在高于或低于其等电点的溶液中是带电的，在电场中能向电场的正极或负极移动。根据支撑物不同，有薄膜电泳、凝胶电泳等。透析：利用透析袋把大分子蛋白质与小分子化合物分开的方法。
5、【答案】：蛋白质分离纯化的主要方法：①盐析 根据性质：蛋白质的沉淀。作用机制：中性盐中和表面电荷，破坏水化层。影响因素：表面电荷、水化层、溶剂性质。②电泳 根据性质：蛋白质的两性解离。作用机制：异性电荷互相吸引，带点粒子在电场中泳动。
蛋白质纯度的测定方法有哪些?
考马斯亮兰法双缩脲法（Biuret法）和Folin—酚试剂法（Lowry法）的明显缺点和许多限制，促使科学家们去寻找更好的蛋白质溶液测定的方法。1***6年由Bradford建立的考马斯亮兰法（Bradford法），是根据蛋白质与染料相结合的原理设计的。
常用色谱法，通过标准品对照图谱进行，分析包括分子筛（大小）、亲和层析（特异性结合）、离子交换（带电性）、疏水（水溶性）；或是沉淀法，包括等电点沉淀、差速离子心沉淀、盐析沉淀、亲和沉淀；透析超滤法；电泳法。这些法说不上常不常用 ，都是根据要分析的蛋白性质决定的。
③亲和层析法（aflinity chromatography）是分离蛋白质的一种极为有效的方法，它经常只需经过一步处理即可使某种待提纯的蛋白质从很复杂的蛋白质混合物中分离出来，而且纯度很高。这种方法是根据某些蛋白质与另一种称为配体（Ligand）的分子能特异而非共价地结合。
如何鉴定纯化后的蛋白又没有活性
1、证明在温度过高或过低的情况下，唾液淀粉酶失活。
2、④电泳法：各种蛋白质在同一pH条件下，因分子量和电荷数量不同而在电场中的迁移率不同而得以分开。
3、建议如下：多看一些文献，参考着优化一下构建、表达、纯化工艺；做一下活性检测的方法学论证，可以找有活性的蛋白来作为阳性对照，用无关蛋白来做阴性对照。
4、常用色谱法，通过标准品对照图谱进行，分析包括分子筛（大小）、亲和层析（特异性结合）、离子交换（带电性）、疏水（水溶性）；或是沉淀法，包括等电点沉淀、差速离子心沉淀、盐析沉淀、亲和沉淀；透析超滤法；电泳法。这些法说不上常不常用 ，都是根据要分析的蛋白性质决定的。
5、如果要测定固体培养基上生长的放线菌或丝状真菌，可先加热至50℃，使琼脂熔化，过滤得菌丝体，再用50℃的生理盐水洗涤菌丝，然后按上述方法求出菌丝体的湿重或干重。除了干重、湿重反映细胞物质重量外，还可以通过测定细胞中蛋白质或DNA的含量反映细胞物质的量。
6、MTT比色法检测细胞活性 （一）原理 活细胞内线粒体琥珀酸脱氢酶能催化无色的MTT形成蓝色的甲肷，其形成的量与活细胞数和功能状态呈正相关。对细胞活力有影响的表达蛋白活性检测可以通过MTT比色法进行。
列举蛋白质的分离纯化方法,并分别阐明其原理。
1、常见的分离提纯蛋白质的方法有： 盐析与有机溶剂沉淀：在蛋白质溶液中加入大量中性盐，以破坏蛋白质的胶体性质，使蛋白质从溶液中沉淀析出，称为盐析。常用的中性盐有：硫酸铵、氯化钠、硫酸钠等。盐析时，溶液的pH在蛋白质的等电点处效果最好。
2、常用的蛋白质纯化方法有离子交换色谱、亲和色谱、电泳、疏水色谱等等 离子交换色谱：蛋白质和氨基酸一样会两性解离，所带电荷决定于溶液pH。pH小于pI时蛋白质带正电，pH大于pI时蛋白质带负电。不同蛋白质等电点的蛋白质在同一个溶液中，表面电荷情况不同。
3、蛋白质的分离纯化方法有：沉淀，电泳：蛋白质在高于或低于其等电点的溶液中是带电的，在电场中能向电场的正极或负极移动。根据支撑物不同，有薄膜电泳、凝胶电泳等。透析：利用透析袋把大分子蛋白质与小分子化合物分开的方法。
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