生物细胞重组方法-细胞重组的主要方式及特点
本篇文章给大家分享生物细胞重组方法，以及细胞重组的主要方式及特点对应的知识点，希望对各位有所帮助。
简述信息一览：
- 1、细胞融合的三种方法和原理
- 2、重组DNA技术是如何实现的?
- 3、DNA的重组方式有哪些
- 4、什么是基因重组,在原核微生物中哪些方式可引起基因重组。
- 5、重组体导入诉诸细胞的常用方法及其各自的特点是什么
- 6、重组DNA技术是如何操作的?
细胞融合的三种方法和原理
电融合法：电融合法是70年代未期和80年代初期发展起来的一种新的细胞融合方法。Senda在1***0年首先应用电脉冲，通过微电极在显微镜下使植物细胞融合，奠定电融合技术基础。
细胞融合的主要方法是：病毒介导的细胞融合：优点是对细胞毒性较小，融合细胞易于存活；缺点为使用前需要病毒的繁殖与灭活，操作繁琐，如灭活不完全则易对实验人员造成伤害，因此现在一般不使用此方法。
诱导细胞融合的方法有三种：生物方法（病毒）、化学方法（聚乙二醇PEG）、物理方法（离心，震动，电***）。某些病毒如：仙台病毒、副流感病毒和新城鸡瘟病毒的被膜中有融合蛋白（fusion protein），可介导病毒同宿主细胞融合，也可介导细胞与细胞的融合，因此可以用紫外线灭活的此类病毒诱导细胞融合。
细胞融合的方法有三种：生物方法、化学方法、物理方法。细胞融合也称细胞杂交，是指细胞通过介导和培养，在离体条件下用人工方法将不同种的细胞通过无性方式融合（合并）成一个核或多核的杂合细胞的过程。
原理是细胞膜具有一定的流动性，方法是电、震荡、离心、聚乙二醇、灭活的仙台病毒。
电融合法 电融合法是70 年代未期和80 年代初期发展起来的一种新的细胞融合方法。Senda （1***0）首先应用电脉冲， 通过微电极在显微镜下使植物细胞融合， 奠定电融合技术基础 （2）激光诱导卵细胞融合 激光诱导卵细胞融合是最新的细胞融合方法。该法为张闻迪（ 1 9 8 8 ） 等人首先应用。
重组DNA技术是如何实现的?
重组体分子的转化子克隆的选择和筛选。[考点]重组DNA的过程。重组DNA也叫基因工程，指指在体外将核酸分子插入病毒、质粒或其他载体分子中，构成遗传物质的重新组合，使之进入原先没有这类分子的寄主细胞内并进行持续稳定的繁殖和表达的过程。
重组DNA技术主要包括四个步骤：提取目的基因、目的基因与运载体结合、将目的基因导入受体细胞、目的基因的检测和表达。提取目的基因 获取目的基因主要有两条途径：一条是从供体细胞的DNA中直接分离基因；另一条是人工合成基因。直接分离基因最常用的方法是“鸟枪法”，又叫“散弹射击法”。
重组DNA技术一般包括以下几步：获得目的基因；与克隆载体连接，形成新的重组DNA分子；用重组DNA分子转化受体细胞，并能在受体细胞中***和遗传；对转化子筛选和鉴定；对获得外源基因的细胞或生物体通过培养，获得所需的遗传性状或表达出所需要的产物。
重组DNA技术是指将一种生物体（供体）的基因与载体在体外进行拼接重组，然后转入另一种生物体（受体）内，使之按照人们的意愿稳定遗传并表达出新产物或新性状的DNA体外操作程序，也称为分子克隆技术。因此，供体、受体、载体是重组DNA技术的三大基本元件。
DNA的重组方式有哪些
1、一是形成配子（减数分裂）过程中，同源染色体联会时，非姐妹染色单体发生局部交换，实现基因重组； 二是***和卵细胞完成受精时，分别来自父本和母本的基因实现重组。三是人为的DNA重组技术。
2、重组DNA片段的取得主要的方法有：①利用限制酶取得具有粘性末端或平整末端的DNA片段；②用机械方法剪切取得具有平整末端的DNA片段，例如用超声波断裂双链DNA分子；③经反向转录酶的作用从mRNA获得与mRNA顺序互补的DNA单链，然后再***形成双链DNA（cDNA）。例如人的胰岛素和血红蛋白的结构基因都用这方法获得。
3、目的基因的获得：通过一定的方法得到需要进行操作的目的DNA，常用的方法有化学合成法，基因组文库法和cDNA文库法。（2）目的基因与载体分子在体外进行连接反应，形成重组体：通过限制性内切酶对含目标片段的DNA和载体进行切割后，通过DNA连接酶进行连接，完成基因的重组过程。
4、自然界最基本的dna重组方式是同源重组。重组dna技术是在人们对自然界基因转移和重组的认识基础上创立的新技术。自然界基因转移伴发重组有几种形式：位点特异的重组、同源重组及转座重组。依赖整合酶、在两个dna序列的特异位点间发生的整合称位点特异的重组。
5、农杆菌转化法：农杆菌是土壤中的一种微生物，在自然条件下感染双子叶植物和裸子植物，对大多数单子叶植物没有感染能力。农杆菌进入植物细胞后，其Ti质粒上的T-DNA会转移到受体细胞染色体的DNA上，目的基因进入植物细胞。
6、基因重组有转化、接合、转导三种形式。转化是供体细胞研碎物中的DNA片段直接吸收进入活的受体细胞的基因重组方式。受体细胞获得了供体细胞的部分遗传性状。细胞的接合是遗传物质通过细胞与细胞的直接接触而进行的转移和重组。遗传物质通过噬菌体的携带而转移的基因重组称为转导。
什么是基因重组,在原核微生物中哪些方式可引起基因重组。
基因工程是把外源基因插入生物原遗传物质中的过程，属于特殊的基因重组。按照常理基因重组包括：减数第一次分裂前期同源染色体非姐妹染色单体交叉互换和减数第一次分裂后期非同源染色体自由组合。
基因重组指在生物体进行有性生殖的过程中，控制不同性状的基因重新组合。其发生在二倍体生物的每一个世代中。每条染色体的两份拷贝在有些位置可能具有不同的等位基因，通过互换染色体间相应的部分，可产生与亲本不同的重组染色体。
原核微生物中，自然发生的基因重组方式主要有结合、转导、转化和原生质融合等方式。真核微生物中有有性杂交、准性杂交、酵母菌 2 m m 质粒转移等等。
减数分裂或体细胞有丝分裂均有可能发生基因重组。基因重组的特点是双DNA链间进行物质交换。真核生物，重组发生在减数分裂期同源染色体的非姊妹染色单体间，细菌可发生在转化或转导过程中，通常称这类重组为同源重组（homologous recombination），即只要两条DNA序列相同或接近，重组可在此序列的任何一点发生。
一般来说，基因重组分为4个步骤。首先，是获得具有目的基因的片段，即DNA片段。这个片段的取得既可用工具酶，也可以用机械方法剪取DNA片段。用化学合成人工基因片段，是另一种比较简便的有效的方法。第二，是把含有目的基因的片段与载体（质粒或病毒）DNA分子重组在一起。
原核微生物的基因重组 （一）转化 （transformation）转化是细菌中最早被发现的遗传物质转移形式。 l928 年 Griffith 用肺炎链球菌对小鼠的感染实验以及 10 多年后 Avery 等体外转化过程的实现，转化因子 DNA 的证实，是现代生命科学发展的重要起点。
重组体导入诉诸细胞的常用方法及其各自的特点是什么
【答案】：（1）将重组质粒导入原核细胞称转化，通常用氯化钙法使大肠杆菌细胞处于感受态，从而将外源DNA导入细胞。另一个常用方法是用脉冲高压电瞬间处理，使外源DNA高效导入细胞，称为电穿孔法。（2）将重组体DNA包装成噬菌体，使外源基因导入宿主细胞称转导，在适宜条件下使转化率提高。
dna重组体导入植物细胞的方法主要有：农杆菌转化法、基因枪法和花粉管通道法；dna重组体导入动物细胞的方法：显微注射技术。
pBR322质粒载体的第三个优点是，具较高的拷贝数，而且经过氯霉素扩增之后，每个细胞中可累积1000～3000个拷贝。这就为重组体DNA的制备提供了极大的方便。pUC质粒载体pUC载体是在pBR322质粒载体的基础上，组入了一个在其5，—端带有一段多克隆位点的lacZ基因，而发展成为具有双功能检测特性的新型质粒载体系列。
原理：基因重组，通过基因重组产生新的基因型，从而产生新的优良性状。优缺点：可以把不同种、属的特征、特性结合起来，突破种属界限，扩大遗传变异，从而创造新的变异类型或新物种。产生的后代为远缘杂种。由于远缘杂交往往重演物种的进化的历程，故也是研究生物进化的重要实验手段。
再经过选择和培育，获得新品种的方法。转基因是将特定的外源基因片段导入生物体的基因组中，是一种外源基因的引入手段；杂交是不同基因型个体之间通过交配而实现的双亲基因重组，不会产生新的基因。同时，转基因可以直接在当代表现出来，而杂交表象在后代才能表现出来。
重组DNA技术是如何操作的?
1、重组DNA技术一般包括以下几步：获得目的基因；与克隆载体连接，形成新的重组DNA分子；用重组DNA分子转化受体细胞，并能在受体细胞中***和遗传；对转化子筛选和鉴定；对获得外源基因的细胞或生物体通过培养，获得所需的遗传性状或表达出所需要的产物。
2、重组DNA技术主要包括四个步骤：提取目的基因、目的基因与运载体结合、将目的基因导入受体细胞、目的基因的检测和表达。提取目的基因 获取目的基因主要有两条途径：一条是从供体细胞的DNA中直接分离基因；另一条是人工合成基因。直接分离基因最常用的方法是“鸟枪法”，又叫“散弹射击法”。
3、DNA重组技术步骤如下：质粒DNA 提取的pQE-31和pUC18-CAT 质粒。制备重组DNA 在灭菌的5mL 离心管中，加入pQE-31质粒10mL（2mg／mL），2mL酶切缓冲液，1mL BamHI 和HindIII酶 的混合液（各含10个单位），无菌双蒸水7mL，至反应混合物总体积为20mL，离心混匀，37℃反应过夜。
4、基因克隆（gene cloning）或分子克隆，又称为重组DNA技术，是应用酶学方法，在体外将不同来源的DNA分子通过酶切、连接等操作重新组装成杂合分子，并使之在适当的宿主细胞中进行扩增，形成大量的子代DNA分子的过程。例如，要获得人类基因组中的某个基因，我们就需要借助基因克隆技术，进行目的基因的分离、克隆和扩增。
5、载体 ，提取 目的基因 片段，将目的基因片段连到载体上获得重组DNA，将重组DNA导入到 宿主细胞 中。常用载体有质粒（一般克隆10bp左右的DNA片段）、噬菌体（与质粒相比，噬菌体可以克隆较大的DNA片段，噬菌体M13可以使DNA以单链 形式 被提取出来）、黏粒（可以克隆45bp左右的DNA片段）。
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