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鉴定蛋白质用的是-做蛋白质的鉴定实验可用什么材料

简述信息一览:

现在国内检测蛋白质用什么方法?涉及到哪些化学仪器?

1、Folin—酚试剂法最早由Lowry确定了蛋白质浓度测定的基本步骤。以后在生物化学领域得到广泛的应用。这种蛋白质测定法是最灵敏的方法之一。过去此法是应用最广泛的一种方法,由于其试剂乙的配制较为困难(现在已可以订购),近年来逐渐被考马斯亮兰法所取代。

2、蛋白质纯度鉴定通常***用物理化学的方法。例如等电聚集、聚丙烯酰胺凝胶电泳、SDS-PAGE、毛细管电泳以及沉降分析等。如果制品是纯的,在这些分析的图谱上只呈现一个峰或一个条带。任何单独一种鉴定只能认为是蛋白质分子均一性的必要条件而不是充分条件。

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(图片来源网络,侵删)

3、目前实验室较多用Folin-酚法测定蛋白质含量,此法的特点是灵敏度高,较双缩脲高两个数量级,较紫外法略高,操作稍微麻烦,反应约在15分钟有最大显色,并最少可稳定几个小时,其不足之处是干扰因素较多,有较多种类的物质都会影响测定结果的准确性。

4、蛋白质分离鉴定的常用方法: 沉淀法 沉淀法也称溶解度法。其纯化生命大分子物质的基本原理是根据各种物质的结构差异性来改变溶液的某些性质,进而导致有效成分的溶解度发生变化。

5、凯氏定氮法 凯氏定氮法是测定化合物或混合物中总氮量的一种方法。即在有催化剂的条件下,用浓硫酸消化样品将有机氮都转变成无机铵盐,然后在碱性条件下将铵盐转化为氨,随水蒸气蒸馏出来并为过量的硼酸液吸收,再以标准盐酸滴定,就可计算出样品中的氮量。

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(图片来源网络,侵删)

用什么鉴定蛋白质

鉴别蛋白质的方法有哪些简述其原理如下:凯氏定氮法 凯氏定氮法是由丹麦化学家凯道尔于1833年建立的,现已发展为常量、微量、平微量凯氏定氮法以及自动定氮仪法等,是分析有机化合物含氮量的常用方法。

双缩脲试剂是一种用于鉴定蛋白质的分析化学试剂。它是一种碱性的含铜试液,呈蓝色,由0.1g/mL氢氧化钠或氢氧化钾、0.01g/mL硫酸铜和酒石酸钾钠配制而成。会遇到蛋白质显紫色。

考马斯亮蓝反应:考马斯亮蓝在游离状态下呈红色,而与蛋白质通过疏水作用结合后呈蓝色。

双缩脲法。双缩脲法是第一个用比色法测定蛋白质浓度的方法,硫铵不干扰显色, Cu2+与蛋白质的肽键,以及酪氨酸残基络合,形成紫蓝色络合物,此物在540nm波长处有最大吸收。

双缩脲法 双缩脲法是一个用于鉴定蛋白质的分析方法。双缩脲试剂是一个碱性的含铜试液,呈蓝色,由1%氢氧化钾、几滴1%硫酸铜和酒石酸钾钠配制。当底物中含有肽键时(多肽),试液中的铜与多肽配位,配合物呈紫色。可通过比色法分析浓度,在紫外可见光谱中的波长为540nm。

蛋白质:可用双缩脲试剂,颜色为紫色。鉴定生物组织中是否含有蛋白质时,常用双缩脲法,使用的是双缩脲试剂,发生的是双缩脲反应。双缩脲反应实质是在碱性环境下的Cu2+与双缩脲发生的紫色反应。

目的蛋白的鉴定方法有哪些?

如果蛋白有纯化标签并且是过表达的话就比较容易判断,一般纯化过程中通过SDS电泳不同组分确定目的蛋白。如果没有纯化标签,一般是通过SDS电泳或者双向电泳和蛋白活性实验(如果蛋白有生物活性,比如酶),或者通过western blot来确定目的蛋白。如果再想精确的话,就是N端测序或者做肽谱。

④电泳法:各种蛋白质在同一pH条件下,因分子量和电荷数量不同而在电场中的迁移率不同而得以分开。

凯氏定氮法:根据氮在蛋白质分子中含量恒定(平均占16%),因此测定出样品中氮的含量后,即可求出样品中蛋白质含量。(2)双缩脲法:双缩脲试剂是一个碱性的含铜试液,呈蓝色,由1%氢氧化钾、几滴1%硫酸铜和酒石酸钾钠配制。当底物中含有肽键时,试液中的铜与多肽配位,配合物呈紫色。

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